XL2-Blue Chemically Competent Cell

基因型：

TetRΔ(mcrA)183 Hte[F′{proAB lacIqlacZM15Tn10(TetR)AmyCamR}](mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1supE44thi-1 recA1 gyrA96 relA1

簡要說明：

XL2-Blue菌株來源于XL1-Blue菌株，為Hte(hightransformation efficiency)基因型，Hte是Stratagene開發(fā)的特異性提高感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率及大質(zhì)粒轉(zhuǎn)化能力的宿主菌基因型，已成功應(yīng)用于40kd質(zhì)粒的構(gòu)建。Hte使得XL2-Blue適用于大質(zhì)粒DNA和重組產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化，降低片段大小的偏愛性，多用于文庫構(gòu)建。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。hsdSMR突變導(dǎo)致EcoK核酸內(nèi)切酶系統(tǒng)缺失，增強(qiáng)了外源DNA的穩(wěn)定性和提取質(zhì)量。 lacZΔM15 的存在使XL2-Blue菌株可用于藍(lán)、白斑篩選。此菌株具有四環(huán)素和LU霉素抗性。High5TM系列XL2-Blue感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>1×109cfu/μg。

操作說明：

1.XL2-Blue感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時(shí)迅速插入冰中），加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。 

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的2YT或LB無菌培養(yǎng)基，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。 

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少14h。

注意事項(xiàng)：

1.感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。 

2.混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。